血清、血漿、細胞裂解液等生物標本處理

樣本存放和穩定性：

樣本在2-8度(du)條件下，是可以儲(chu)藏72h，在-20度(du)或-80度(du)是可以儲(chu)藏半年以上。樣本收集后，并非一(yi)次檢測完，請(qing)按(an)照一(yi)次用量分(fen)開包裝(zhuang)凍(dong)存，防止反復凍(dong)融(rong)。

血清：將收集的康那動物血清分離(li)管(guan)的全血標本(ben)在(zai)室溫(wen)置放0.5-2小時或(huo)4度(du)過夜，隨后1000×g離(li)心20min，取上清就可以，或(huo)將上清置于-20度(du)或(huo)-80度(du)存(cun)放，但應盡量避免反復凍融。

血漿：用EDTA或肝素做為抗(kang)凝劑采(cai)集標本(ben)，并把標本(ben)在采(cai)集后的30分鐘內于(yu)2-8度(du)1000×g離心15min，取(qu)上清就可以檢測，或將(jiang)上清置于(yu)-20度(du)或-80度(du)存放(fang)，但應盡量(liang)避免反(fan)復凍融。

組織勻漿：用預(yu)冷(leng)的(de)PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組(zu)織(zhi)(zhi)，去除殘留血(xue)液（勻(yun)漿(jiang)中裂解的(de)紅(hong)細胞會影(ying)響測量結果），稱重后將(jiang)組(zu)織(zhi)(zhi)剪碎。將(jiang)剪碎的(de)組(zu)織(zhi)(zhi)與對應體積的(de)PBS（一(yi)般按1:9的(de)重量體積比，比如1g的(de)組(zu)織(zhi)(zhi)樣品對應9mL的(de)PBS，具(ju)體體積可(ke)根(gen)據實驗需要適(shi)當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑(ji)）添加玻璃(li)勻(yun)漿(jiang)器中，于(yu)冰(bing)上充分研磨。以便進(jin)一(yi)步裂解組(zu)織(zhi)(zhi)細胞，能夠對勻(yun)漿(jiang)液進(jin)行超聲破碎，或反復凍(dong)融(rong)。最后將(jiang)勻(yun)漿(jiang)液于(yu)5000×g離(li)心5~10min，取上清(qing)就(jiu)可(ke)以檢測，或將(jiang)上清(qing)置于(yu)-20度或-80度存放(fang)，但應盡量避免反復凍(dong)融(rong)。

細胞裂解液：吸棄(qi)培養液(ye)，用(yong)PBS（0.01M，pH7.4）將(jiang)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)洗(xi)一遍(bian)。用(yong)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)刮(gua)刮(gua)下細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)（不能(neng)用(yong)胰酶(mei)和EDTA處理），添(tian)加(jia)2-5mLPBS（0.01M，pH7.4）。懸浮細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)可省(sheng)略。收集細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)懸液(ye)，4度(du)1000×g離心(xin)10min，棄(qi)去(qu)培養基，用(yong)預(yu)冷(leng)的PBS潤洗(xi)3次(ci)。加(jia)入適量(liang)(liang)的預(yu)冷(leng)PBS或(huo)非(fei)變性細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)裂解(jie)液(ye)（臨用(yong)前(qian)添(tian)加(jia)蛋白酶(mei)抑制(zhi)劑）重(zhong)懸細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao),通常(chang)6孔板一個孔的細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)量(liang)(liang)需要150-250μLPBS重(zhong)懸。將(jiang)樣品(pin)(pin)放置-20度(du)或(huo)-80度(du)，使樣品(pin)(pin)冷(leng)凍，再放室溫(wen)解(jie)凍樣品(pin)(pin)，反復凍融3次(ci)，使細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)充分裂解(jie),也(ye)可將(jiang)樣品(pin)(pin)進行超聲破碎，從而達到(dao)裂解(jie)的目(mu)的。4度(du)10000×g離心(xin)10min，除去(qu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)碎片，取上清(qing)就可以(yi)檢測，或(huo)將(jiang)上清(qing)置于(yu)-20度(du)或(huo)-80度(du)存放，但應盡量(liang)(liang)避免反復凍融。

細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離(li)心(xin)20min，取上清就可以檢測，或將(jiang)上清置于-20度(du)或-80度(du)存放(fang)，但應盡量避免反復凍融。

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